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德國Lavision Biotec---雙光子熒光顯微鏡TriM Scope
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德國Lavision Biotec
---雙光子熒光顯微鏡TriM Scope
雙光子吸收/ 激發技術的原理：在強光激發下，分子同時吸收兩個光子，從基態躍遷到兩倍光子能量的激發態的過程。兩個光子可以是相同波長的，也可以是不同波長的，但必須是同時吸收（兩個光子到達被激發分子的時間間隔小于1 飛秒）?？梢赃@樣理解，先吸收一個光子的能量躍遷到一個虛擬的中間態，然后再吸收一個光子的能量躍遷到激發態。雙光子顯微鏡相對于共聚焦等其他顯微鏡的優點：
- 光損傷小：由于雙光子顯微鏡使用的是可見光或近紅外光作為激發光源，這一波段的光對活體細胞和組織的光損傷小，適用于長時間的研究；
- 穿透能力強：相對于紫外光，可見光和近紅外光都具有更強的穿透能力，因而受生物組織散射的影響更小，解決對生物組織中深層物質的層析成像研究問題；研究表明，共聚焦熒光成像的成像深度一般在50 微米左右，而雙光子顯微鏡的成像深度可達1000 微米；
- 高分辨率：由于雙光子吸收截面很小，只有在焦平面很小的區域內可以激發出熒光，雙光子吸收僅局限于焦點處的體積約為波長3 次方的范圍內；
北京大學 謝曉亮教授 （北大長江講座教授；哈佛講席教授，美國科學院院士）在美國哈佛大學使用LaVision BioTec的雙光子顯微鏡之后，在北京大學建立北京生物動態光學成像中心之時，又再度引進雙光子顯微鏡，并且給予顯微鏡該高度評價。 LaVision BioTec于2000在德國成立，作為一家專業的雙光子顯微鏡和OPO振蕩器、雙光子分光器等設備生產商，LaVision BioTec在短短的10年內已經成功的為歐美等國家諸多大學和研究所提供了超過 110套雙光子顯微鏡設備 和 10多套片掃描（全面掃描）熒光顯微鏡 ，成為該領域質量最好的供應商。LaVision BioTec 的 雙光子顯微鏡 TriM Scope 的獨 特優勢（同類產品中獨有的優點） : ☆ 全球 獨有的多光束快速掃描模式： 用戶可根據需要調節光束模式從傳統的單光束掃描模式到La Vision BioTec 獨有的多光束快速掃描模式，即1 、2 、4 、8 、16 、32 、64 束光的不同模式選擇。 多光束平行掃描技術是指入射光經過分光器，分解為64束光，同時進入顯微鏡，通過物鏡聚焦在樣品上，通過XY掃描器利用這64束光同時進行掃描，并調整Z軸進行三維成像，保證最低的樣品損傷的同時極大地提高了掃描速度。
☆ 全球第一個可用軟件調節的雙光子顯微鏡： ImSpector Pro 軟件支持了先進的掃描模式，并且支持用戶在ms 毫秒之內切換掃描區域。因此，TriM Scope 是研究光活化、光釋放和光漂白（photo activation, uncaging and FRAP ）的理想完美工具。
☆ 同類產品中具有最優的檢測效率： TriM Scop 可以支持最多達8 個 non-descanned PMT, NDD 可以是cooled generation III GaAsP PMT 或者APD detector 可以多傳輸40% 效率的量子，比同類產品具備更佳的檢測效率。
☆ 世界上唯一能夠支持OPO 技術的顯微鏡： OPO 技術– 紅光和蛋白的激發：經典的Ti:Sa 激光器成像紅光的能力是非常有限的，因為經典的激發波長是1125 到1250 nm, 并不在Ti:Sa 激光器的轉換范圍之類。OPO 技術解決了這個問題，因為它能傳輸可調的fs 激光脈沖到>1100 nm 的范圍。
第一代雙光子顯微鏡 ：LaVision BioTec 革新的技術提供了獨特的雙光子顯微鏡-TriM Scope I ：
☆ 用戶可根據需要調節光束模式： 從傳統的單光束掃描模式到 La Vision BioTec 的多光束快速掃描模式，即 1 、 2 、 4 、 8 、 16 、 32 、 64 束光的不同模式選擇?？焖賿呙枘Ｊ郊纯杀ＷC最大可允許 64 束光同時掃描，并且保證最低的樣品損傷，主要有下面三個原因 :
Ø 64 束光能夠提供單光束的 64 倍熒光強度并且保證低損傷高熒光強度
Ø 保證了高的幀速率
Ø CCD 攝像頭比 PMTs 更高靈敏度
☆ TriM Scope 可以提供最多達 8 個 NDD 攝像頭給經典的單光束掃描顯微鏡 ， 2 個 CCD 攝像頭， 1 個 TCSPC 探測器為 FILM （ Fluorescence Lifetime Imaging Microscope ）測量。 3 個 NDD 可以安裝到靠近物鏡的位置， 2 個 NDD 可以插入到傳送器。
☆ LaVision BioTec 的 ImSpector Pro 軟件支持了先進的掃描模式，并且支持用戶在 ms 毫秒之內切換掃描區域。 因此， TriM Scope 是研究光活化、光釋放和光漂白（ photo activation, uncaging and FRAP ）的理想完美工具。
☆ TriM Scope 還可以結合 1 個 OPO 使用 ， OPO 可以轉換 Ti:Sa 激光器的波長從 800-880 nm 轉變到 1100-1300 nm 。因此紅光染料或者蛋白質可以被有效地激發出雙光子，保證了很低的漂白率和最深的穿透深度。 LaVision BioTec 可以同時使用 Ti:Sa 激光和 OPO 來掃描，就能同時激發出綠 / 黃和紅光。
Mitochondria Hela cells human skin 
Biopsie of Lung SHG & Red in Zebrafish Image in Lung Slice 
第二代雙光子顯微鏡 : LaVision BioTec 最新的雙光子顯微鏡- 第二代雙光子顯微鏡TriM Scope II 具有新的特點： - 自動校準的雙光子顯微鏡
- 穿透最深的樣品深度，并能應用OPO 技術
- 可升級到LaVision BioTec 的64 束光分光技術
- 多用戶使用環境中的雙光子顯微鏡
TriM Scope II 雙光子顯微鏡提供了第二代的雙光子顯微鏡，并且在各種使用環境下能夠完成快速、深度成像?；九渲檬菃喂馐鴴呙柙?，包括正置機身和2 個靠近物鏡的NDD 檢測器。作為選件，該顯微鏡可以配置:
☆ LaVision BioTec 專利的光學分光器，用于64路光束的平行掃描
☆ 最多可達到8 個NDD檢測器
☆ 各種不同的CCD 攝像頭
☆ LaVision BioTec 的快速TCSPS檢測器
☆ 用于共聚焦檢測的descanned 檢測器
☆ 預啁啾補償器
☆ OPO 技術
